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蛍光イメージングフィルタのチュートリアル![]() ![]() Please Wait ![]() フィルターセットMDF-YFPの透過率グラフ。ダイクロイックミラー(緑色)は励起波長域(青色)内の光を反射し、発光波長域(赤色)の光を透過します。 蛍光顕微鏡用のフィルタ蛍光色素分子 単体の蛍光色素分子はフォトブリーチングによる破壊(光励起のケミカルダメージや共有結合修飾による不可逆破壊)がなければ、連続して励起することが可能です。フォトブリーチングの前に特定の蛍光色素分子が受ける励起および発光サイクルの平均的な数は、蛍光色素分子の分子構造と局所的環境により変わります。数個の光子を発光した直後にフォトブリーチングする蛍光色素分子もあれば、ずっと強固でブリーチングする前に何千あるいは何億ものサイクルを経験する蛍光色素分子もあります。 蛍光顕微鏡用のフィルタ 励起フィルタ ダイクロイックミラー ダイクロイックミラー1枚を実験セットアップで入射に対して45°に配置することにより、励起光(上図内に青色で表示)はダイクロイックミラーの表面から反射され、試料と顕微鏡対物レンズへと向かいます。一方、試料から発光する蛍光(上図内に赤色で表示)はミラーを透過して検出システムへと向かいます。 ダイクロイックミラーは蛍光顕微鏡で重要な役割を果たしますが、不要な光を遮断することとなると完璧とは言えません。一般に、ダイクロイックミラーにより、カットオフ波長より短い波長の光の約90%は反射され、これより長い波長の光の約90%は透過されます。そのため、試料によって放射される(励起光より)長波長の蛍光と一緒に、励起光の一部もダイクロイックミラーを透過してしまいます。 この不要な光が検出システムに届くのを防ぐために、ダイクロイックフィルタの他に吸収フィルタが使われます。 吸収フィルタ
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